#1 相對于氣相色譜，液相的優(yōu)勢在哪里？

答：液相和氣相相比的優(yōu)勢有很多，主要在于應(yīng)用范圍更廣。氣相只限于容易氣化的低分子量物質(zhì)的分析測定，對象大部分是基礎(chǔ)化工原材料；而任何能溶解于某溶劑的物質(zhì)都能用液相分析，適用對象是分子量從幾十到幾萬的廣大范圍。在制藥、化工、環(huán)保、食品等諸多重要領(lǐng)域，液相都已成為主導(dǎo)的分析工具。也有兩者都能應(yīng)用的交叉情況，但液相的制樣更簡單。液相色譜的出現(xiàn)克服了氣相色譜不能直接用于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定及高分子化合物的弱點。

#2 經(jīng)常有客戶疑惑，柱子是否可以反沖？

什么樣的柱子可以反沖？什么不可以？

反沖后是正著用，還是反著用？

答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。月旭的絕大多數(shù)色譜柱都是可以反沖，并且我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

#3 有的廠商為避免堵塞，使用了較大孔徑（2～5μm）的前篩板，這種情況反沖會將填料沖出。那么，在使用說明書中會說明前后篩板的孔徑嗎？

答：如果前后篩板孔徑不對稱，廠商肯定也會在說明書里特別提到的。月旭科技的色譜柱前后篩板孔徑都是對稱的。

#4 反沖的時候要接檢測器嗎？

答：反沖就是將柱子反向連到系統(tǒng)中，理論上接不接檢測器都可以，不過，若樣品的確比較臟，污染物比較多的情況，建議不接檢測器，直接出口端放空接廢液瓶。因為有污染物沖出來，連檢測器容易造成檢測器的污染。

#5 用離子交換柱做方法開發(fā)的時候，用乙腈和水作為流動相，在調(diào)整梯度的時候發(fā)現(xiàn)，剛開始用60%乙腈，RT為2.5分鐘，調(diào)到40%乙腈，RT沒有變化，30%也沒有變化，一直調(diào)到20%的時候，RT突然變到了約13分鐘，請問這是什么原因？

答：離子交換柱的保留機理主要是靜電相互作用力，影響因素主要有離子強度和pH，此外還有氫鍵等次級作用力，甚至分子排阻作用也可能存在，因而離子交換色譜中，保留機理并非像反相色譜那樣簡單，更不是單純的跟有機相的比例呈正相關(guān)，需要考慮是否水相比例增大導(dǎo)致了流動相離子強度的改變，或增大了氫鍵作用力等。此外，離子交換色譜柱的基質(zhì)是硅膠還是聚合物也有不同的影響。

#6 對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，色譜柱在運輸和儲存過程中，有可能出現(xiàn)柱內(nèi)溶劑揮發(fā)的情況，導(dǎo)致填料干掉，鍵合相得不到充分潤濕，因此需要活化。月旭色譜柱按照說明書活化方式活化即可。除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，具體平衡方式也很簡單，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是：將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。

#7 C18柱會用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，這樣做的目的是什么呢？

答：C18柱會用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，因為，色譜柱到達(dá)用戶手中時，時間長短不一，在存儲和運輸?shù)倪^程中，可能存儲液有些揮發(fā)，低流速的甲醇可以很好的浸潤固定相，使鍵合相很好的伸展，用溶劑平衡好系統(tǒng)后，可以采取多次進(jìn)樣或者加大進(jìn)樣量的方式以更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，這樣用樣品將色譜柱中的活性位點飽和，就不會出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。

#8 我前幾天剛剛裝上一個新的C18柱，在進(jìn)樣之前我用100%的甲醇沖了半個多小時。剛才看到上面寫的要活化什么的？不知道我只沖洗半小時就開始用對柱子有沒有影響？對出峰什么的有沒有影響呢？

答：首先，若僅僅是新柱活化，建議嚴(yán)格按照廠家色譜柱說明書的操作進(jìn)行；其次，樣品老化，不是所有的測定，都需要對新柱子用所測樣品老化。但先按方法程序進(jìn)樣幾針，觀察到峰面積保留時間不再有明顯變化，再開始正式測定，這是一個好習(xí)慣。

#9 測定多肽，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？

答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18或C8柱就能測定，也有用離子交換柱、水性柱和HILIC親水作用柱的。若流動相中含有三lv乙酸這類酸性添加劑，建議還是使用耐受低pH的色譜柱，如月旭科技Ultimate® LP系列。

#10 氨基柱在進(jìn)酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？

答：氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5～10倍的柱體積的含0.5～1.0％NH3的乙腈/水(50/50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后，再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨，如0.05％。