流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成。原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過濾，但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別：當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級(jí)，水用石英亞沸水或其它超純水時(shí)，在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時(shí)，過濾并無更多實(shí)際意義。

當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí)，則過濾是必要的，如前所述，當(dāng)緩沖溶液放置一段時(shí)間，在使用前還應(yīng)重新過濾（含有緩沖鹽的流動(dòng)相，長(zhǎng)菌較快，建議現(xiàn)用現(xiàn)配）。

所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0.45μm(0.22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系，二者不可混用，以防止濾膜溶解而造成污染。

裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換，以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

當(dāng)樣品中含有對(duì)色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生永jiu性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì)，以及可能對(duì)柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000psi (磅/平方英寸)，但過高及過大的壓力變化均會(huì)縮短色譜柱的壽命，避免的方法是：

1）柱壓過高時(shí)，盡可能采用較小的流速，以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

2）當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

3）使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會(huì)很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時(shí)，柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。

一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，更應(yīng)降低使用溫度。

溫度過高會(huì)加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而使填料性質(zhì)改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

請(qǐng)您留意色譜柱說明書中的pH適用范圍，目前市面上大部分鍵合硅膠色譜柱表示的pH適用范圍是2-10，但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避免ji端的pH條件。（當(dāng)pH≤2時(shí)，建議使用月旭Ultimate^® LP系列色譜柱；當(dāng)pH≥8時(shí)，建議使用月旭Xtimate^®系列色譜柱）。若您原有的色譜柱在偏堿性條件（pH≥8）下使用，可通過以下方法避免柱損害：

1）在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱（飽和柱）來飽和流動(dòng)相。

2）降低使用溫度。

3）檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑"徹di清洗。

開始試驗(yàn)前，應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對(duì)于新色譜柱，如無特殊說明均為評(píng)價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

保護(hù)柱的作用：過濾掉來自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾"同時(shí)也可以有效除去流動(dòng)相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有不同孔徑的在線過濾器，但在線過濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染，因此，加裝保護(hù)柱是必要的，特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護(hù)分析柱bi不可少的措施。

保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50～100次）后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時(shí)，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。