液相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗液相色譜柱。確保分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。

每天用足夠的時間以流動相來平衡液相色譜柱，就會在處理問題方面獲得大的"補(bǔ)償"，而且液相色譜柱的壽命也會變得更長。

液相色譜柱操作步驟：

a.平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡液相色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡）

b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

 

液相色譜柱填料的選擇

填料粒度

常用的填料顆粒度在3--10um之間，使用小粒徑填料柱效高，但柱壓也高，特別是使用含水量較大的甲醇流動相，由于水與甲醇之間形成氫鍵反應(yīng)，粘度增大，柱壓是不可忽視的因素，柱壓高，很容易產(chǎn)生柱床層塌陷，降低柱子的使用壽命。如要追求高柱效，要用5um填料柱，推薦使用水一乙腈體系。

對于制備液相色譜柱，主要是追求制備量，而分離是次要的。一般選擇粒徑大于10um，廉價(jià)，且柱壓小。

對于UHPLC，填料粒徑較小，壓力也較HPLC高很多。

B、不同內(nèi)徑的液相色譜柱均是分析型的，對于常規(guī)分析很適用。其使用流速為1ml/min，一般儀器均能匹配。柱效高、性能穩(wěn)定、使用壽命較長。

C、液相色譜柱是半制備柱，分析條件可以移植分析柱的，普通液相色譜儀均可使用，可以得到少量純度很高的組分，用于組分的定性及一些研究工作，是一種很實(shí)用的工具。

D、液相色譜柱是制備型液相柱，可制備大量的純品組分，具有商業(yè)價(jià)值。目前，雖然價(jià)格較高，對于制藥行業(yè)來講，是必有的裝備之一。重現(xiàn)性好，柱校更高、分離效果更好、分離時間更短。